ANALISIS GUGUS FUNGSI DENGAN MENGGUNAKAN SPEKTROSKOPI FT-IR DARI VARIASI KITIN SEBAGAI SUBSTRAT KITINASE BAKTERI Pseudomonas sp. TNH-54 ANALYSIS FUNCTIONAL GROUPS USING FT-IR SPECTROSCOPY OF CHITIN VARIATION as Pseudomonas sp. TNH

Abstract

Abstrak. Pada penelitian ini dilakukan variasi jenis kitin sebagai substrat enzim kitinase bakteri Pseudomonassp. TNH-54 yang divariasi dalam bentuk koloidal dengan penambahan HCl pekat dan superfine yang dilarutkan dalam metanol yang dijenuhkan dengan CaCl₂. Karakterisasi berdasarkan hasil analisis spektra IR dari masing-masing substrat menunjukkan bahwa kitin memiliki daerah serapan gugus fungsi yang khas yaitu gugus –OH pada daerah pada daerah 3400 cm^-1, pada daerah 3200 cm^-1 dan 1500 cm^-1 gugus -NH, daerah 1600 cm^-1 gugus C-O, dan daerah 1070 cm^-1 gugus C=O, kecuali pada sepktra IR superfine yang menunjukkan hilangnya serapan pada daerah fingerprint 1316-1317  cm^-1 yang merupakan gugus C-N. Hasil uji aktivitasnya terhadap enzim kitinase bakteri Pseudomonasp. TNH-54 menunjukkan bahwa substrat koloidal memiliki nilai aktivitas yang paling tinggi bila dibandingkan dengan substrat kitin dan kitin superfine yaitu sebesar 0,847 U/mL. Berdasarkan analisis spektra IR dari substrat yang telah diinteraksikan dengan enzim kitinase selama 24 jam tidak menunjukkan pergeseran atau pun penghilangan gugus fungsi akibat degradasi enzim kitinase, hanya terjadi penurunan intensitas relatif (%T) dari gugus fungsi –OH, -NH, C-O, dan C=O pada spektra IR kitin serta kitin koloidal dan kenaikan %T pada gugus fungsi yang sama pada spektra IR superfine dibandingkan dengan spektra IR substrat sebelum mengalami degradasi enzimatik.

Kata kunci: aktivitas kitinase, gugus fungsi, kitin

Abstract. This research was conducted on variation of chitin as a substrate of the chitinase enzyme from bacteria Pseudomonassp. TNH-54 that varied in colloidal form by the addition of concentrated HCl and superfine form which is dissolved in methanol saturated with CaCl₂. Characterization by IR spectra based on the results of each substrate indicated that chitin has the typical functional groups i.e. –OH groups on the area 3400 cm^-1, in the area of 3200 cm^-1 and 1500 cm^-1 –NH groups, the 1600 cm^-1 C-O groups, and 1070 cm-¹ C=O groups, except in superfine’s IR sepectra showed the absence of absorption in the fingerprint 1316-1317 cm^-1, which loss the C-N groups. The result of chitinase activity assay from bacteria Pseudomonas sp. TNH-54 show that colloidal chitin has the highest activity compare with chitin and superfine chitin activity which the values is 0.847 U/mL. Based on the anlysis of IR spectra from the substrate that have interacted with enzyme for 24 H it doesn’t show the shift of spectra or removal of functional groups due to degradation process of chitinase enzyme, but decrease in relative intensity (%T) in spectra of common functional groups such as –OH, -NH, C-O, and C=O for chitin and colloidal chitin spectra’s and increase of %T from the same functional groups for superfine spectra which compare with spectra of each substrate before enzymatic degradation.

Keywords: chitin, chitinase activity, functional group